DNA提取的注意事項
1、 裂解液要預熱,以抑制DNase,加速蛋白變性,促進DNA溶解。
2、 酚一定要堿平衡。苯酚具有高度腐蝕性，飛濺到皮膚、粘膜和眼睛會造成損傷，因此應注意防護。氯仿易燃、易爆、易揮發(fā)，具有神經(jīng)毒作用，操作時應注意防護。5 m: d! o8 g% {3 ^* \
3、 各操作步驟要輕柔,盡量減少DNA的人為降解。
4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾。
5、 異丙醇,乙醇.NaAc,KAc等要預冷,以減少DNA的降解,促進DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
6、 提取DNA過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤干等辦法進行無核酸酶化處理。
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
8、 用大口滴管或吸頭操作，以盡量減少打斷DNA的可能性。* @0 K2 `* m7 S
9、 要用新鮮樣品或液氮冷凍-70度保存的樣品。這樣通過降低內(nèi)切酶的活性DNA的降解。/ I1 U6 y5 m$ F' h! W8 f' b
10、 避免劇烈吸打DNA，不能攪動基因組DNA。4 P9 o1 q( F j, A7 Z' {4 k+ f
11、 吸取基因組DNA時，要用專用的粗口吸頭，普通吸頭可能會切斷DNA或造成DNA缺口。% c# `% F+ R* A2 Z- g
12、 基因組應4度保存，如-20度保存可能導致DNA斷裂。. C3 n* p6 ]& a7 T& G7 Z# \
13、 在準備實驗的過程中，應將DNA樣品放在碎冰上。! |: A4 s0 ?, l: _: W1 D- g* D
14、 用Tris緩沖液溶解DNA。5 O; i" O. q" [
15、 加緩沖液后，為了加速DNA溶解，可以輕輕晃動或輕彈試管。
16、 加入緩沖液后，置于4度過夜，也可以溶解DNA。7 }& {2 m( P1 W. y
17、 將DNA溶液65度溫育10分鐘，可以滅活DNase。
18、 在抽提過程中如果水相和有機層的界面不太清楚，說明其中蛋白質(zhì)含量較高，可增加酚/氯仿抽提的次數(shù)或適當延長離心的時間。& w# d( o" C9 R# m9 F
19、 酚抽提時如果上清液太粘稠，無法進行水相轉移時，可加入適量TES稀釋后再抽提
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